大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

回答下列问题：

(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmOl/L的________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是______________蛋白质。

(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤 膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____(填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____(答出两点即可）。

②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是______。

③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应 _______(填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是___。

【答案】

磷酸缓冲液 甲 鉴别 提供碳源、氮源、维生素 将未接种的培养基在适宜的条件下放置一段时间,观察培养基上是否有菌落出现 小于 (当样品中细菌浓度低时,)培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的个活菌

【解析】

1、凝胶色谱法的原理是:小分子蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长、移动速度较慢,后被洗脱出来:而分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,路程较长、移动速度较快,先被洗脱出来。

2、大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝发生特定的颜色反应,使菌落呈黑色,故可用含有伊红-美蓝的鉴别培养基鉴别大肠杆菌。

3、滤膜法测定活菌数目的原理：当样品中细菌浓度低时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌。

(1)凝胶色谱法的原理是:小分子蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长、移动速度较慢,后被洗脱出来:而分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,路程较长、移动速度较快,先被洗脱出来，则相对分子质量较大的是甲，所用洗脱液是磷酸缓冲液。

(2)①大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝发生特定的颜色反应,使菌落呈黑色,该培养基是伊红-美蓝培养基,因此属于鉴别培养基,蛋白陈是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成,富含有机氮化合物,也含有一些维生素和糖类,因此添加在培养基中主要作为氮源,也可提供碳源和维生素；

②检测培养基是否被污染,需在接种前将空白培养基即未接种的培养基放在适宜的条件下放置一段时间,观察培养基上是否有菌落出现,若有菌落出现,则说明培养基被污染或灭菌不彻底,不能用于接种实践。

③滤膜法测定活菌数目的原理是,当样品中细菌浓度低时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌，滤膜的孔径应小于大肠杆菌。