单克隆抗体由于具有特异性强、灵敏度高、并可大量制备等特点而受到特别关注。单克隆抗体的制备,目前有多种方法。
(1)动物细胞融合制备单克隆抗体:将已免疫过的小鼠B淋巴细胞与__________细胞采用不同于植物细胞融合的方法——__________进行诱导,促使二者进行融合,然后通过筛选得到所需的杂交瘤细胞,此时还需对此细胞进行__________和__________,经多次筛选,才可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞,然后进行体内或体外培养,即可获得大量的单克隆抗体。
(2)基因工程制备单克隆抗体:科学家从某些无限增殖的细胞中分离出质基因中的无限增殖调控基因,利用__________将其与质粒进行结合,形成重组质粒,然后采用__________法将其导人经特定抗原刺激的B细胞中,再进行检测、筛选,得到__________的重组细胞,再经体外培养即可得到单克隆抗体。
(3)细胞核移植技术制备单克隆抗体:将无限增殖的细胞__________,对特定抗原刺激的B细胞________,然后将二者重组,形成重组细胞,再进行筛选、体外培养,即可获得所需的单克隆抗体。
【答案】小鼠骨髓瘤 灭活的病毒克隆化培养抗体检测限制酶和DNA连接酶显微注射既能大量增殖,又能产生特定抗体去核取核
【解析】本题考察了三种制作单克隆抗体的方法,分别是动物细胞融合制作单克隆抗体、基因工程制备单克隆抗体、细胞核移植技术制备单克隆抗体。
(1)动物细胞融合制备单克隆抗体:将已免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,动物细胞融合原理同植物原生质体融合方法类似,常用的诱导因素有聚二乙醇(PEG)、灭火的病毒、电激等;小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后形成的杂交细胞具有迅速大量繁殖的特点,经过筛选后得到杂交瘤细胞,此时,还需对此细胞进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,才可获去足量的能产生所需抗体的细胞,然后再将其进行体内或体外培养,即可获得大量单克隆抗体。
(2)基因工程中质粒作为目的基因的运载体,基因工程制备单克隆抗体:科学家从某些无限增殖的细胞中分离出质基因中的无限增殖调控基因,利用限制酶和DNA连接酶,将其与质粒进行结合,形成重组质粒,然后利用显微注射法,将其导人经特定抗原刺激的B细胞中,再进行检测、筛选,得到既能大量增殖,又能产生特定抗体的重组细胞,再经体外培养即可得到单克隆抗体。
(3)细胞核移植技术制备单克隆抗体:将无限增殖的细胞去核,对特定抗原刺激的B细胞取核,然后将二者重组,形成重组细胞,再进行筛选、体外培养,即可获得所需的单克隆抗体。
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