肺气肿病在北美比较常见，病人以前只能依赖于注射人的α—抗胰蛋白酶做替代疗法，但价格昂贵，英国罗斯林研究所研制成功的转基因羊，其乳汁中含有α一抗胰蛋白酶，可治疗肺气肿病。回答下列问题：

肺气肿病在北美比较常见，病人以前只能依赖于注射人的α—抗胰蛋白酶做替代疗法，但价格昂贵，英国罗斯林研究所研制成功的转基因羊，其乳汁中含有α一抗胰蛋白酶，可治疗肺气肿病。回答下列问题：

（1）为获取目的基因，需要在肝脏细胞中提取__________，通过反转录产生cDNA。

（2）α-抗胰蛋白酶基因与______、标记基因和终止子等调控组件重组在一起，构建基因表达载体，其中标记基因的作用是____________。然后通过显微注射技术，导入羊的受精卵中。也可以将构建好的基因表达载体导入羊体细胞中，再通过__________将该体细胞核注入处于_________期的去核的卵母细胞中。

（3）通过早期胚胎培养，得到早期胚胎。为了选育出能泌乳的雌羊，一般在胚胎的________部位取样，做性别鉴定。

（4）α—抗胰蛋白酶是一种糖蛋白，一般不用传统的转基因大肠杆菌生产，因为__________。

【答案】

α—抗胰蛋白酶的mRNA 乳腺蛋白基因的启动子 筛选含有目的基因的受体细胞 核移植技术 减数第二次分裂中 滋养层 大肠杆菌是原核细胞，不含内质网和高尔基体等细胞器，不能对核糖体合成的蛋内质进行加工，不能产生有生物活性的α—抗胰蛋白酶

【解析】

（1）通过反转录法获取目的基因，需要在肝脏细胞中提取α-抗胰蛋白酶mRNA，通过反转录产生cDNA。

（2）为了让α-抗胰蛋白酶像乳腺分泌蛋白一样随乳汁分泌出来，需要将α-抗胰蛋白酶基因与. 乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，构建基因表达载体，然后通过显微注射技术，导入羊的受精卵中。将构建好的基因表达载体导入羊体细胞中，通过核移植技术将该体细胞核处于减数第二次分裂中期期的去核的卵母细胞中。

（3）做性别鉴定的胚胎一般选取囊胚时期的滋养层细胞。

（4）α-抗胰蛋白酶是一种糖蛋白，一般不用传统的转基因大肠杆菌生产，因为大肠杆菌没有内质网、高尔基体等细胞器，不能对蛋白质糖基化产生有活性的α-抗胰蛋白酶。