萘乙酸作为植物生长调节剂，已证实对人体有一定毒害作用，且随其浓度增加毒害作用增强。以小鼠肝脏毒理实验为依托，研究不同浓度的萘乙酸对小鼠肝细胞增殖活性的影响。请利用以下材料与用具，完善实验思路，预测实验

萘乙酸作为植物生长调节剂，已证实对人体有一定毒害作用，且随其浓度增加毒害作用增强。以小鼠肝脏毒理实验为依托，研究不同浓度的萘乙酸对小鼠肝细胞增殖活性的影响。请利用以下材料与用具，完善实验思路，预测实验结果并进行分析讨论。

实验材料与用具：健康小鼠若干（雌、雄各半）、普通饲料、萘乙酸、手术用具等。

（说明：细胞增殖活性是反映细胞生命力强弱的重要指标，当细胞受到异常的环境因素损伤时，首先表现为增殖活性的降低。现采用MTT法测定细胞悬液吸光度表示小鼠肝细胞增殖活性，在适宜范围内，细胞增殖活性越大，细胞悬浮液吸光度越高。用MTT法测定吸光度的具体过程不作要求。）

（1）实验思路：

①将5000 mg／kg、1000 mg／kg、200 mg／kg萘乙酸分别与普通饲料混合，制成高、中、低剂量的萘乙酸染毒饲料。

②将健康小鼠随机平均分为4组，每组雌雄各半，分笼饲养，编号A、B、C、D组。

③A、B、C组每天分别饲喂_________，D组饲喂_________。

④各组在相同且适宜条件下饲养28天后，取出各组小鼠肝脏，制备小鼠肝细胞悬液，用MTT法测得_________。

⑤对所得数据进行处理和分析。

（2）预测实验结果（以柱形图形式表示实验结果）_______

（3）讨论和

①除上述方法外，还可以利用_________直接进行细胞数目统计，用于表示萘乙酸对小鼠肝细胞增殖活性的影响；计数过程中压在方格上的细胞只计左线和上线上的细胞数的目的是_______。

②进一步研究发现萘乙酸对小鼠肝细胞具有致畸作用，实验中常借助显微镜能观察到的细胞变异类型是________，通常选择__（填时期）的细胞进行观察。

【答案】

适量且等量的高、中、低剂量的萘乙酸染毒饲料 等量的普通饲料 小鼠肝脏细胞增殖活性并记录数据 血细胞计数板 避免重复计数，减少误差 染色体畸变 有丝分裂中期

【解析】

据题文的描述可知：该题以“研究不同浓度的萘乙酸对小鼠肝细胞增殖活性的影响”为情境，考查学生对染色体变异、萘乙酸的作用、探究酵母菌种群数量的变化等相关知识的识记和理解能力，以及具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理的能力。

(1) 依题意可知，本实验的目的是研究不同浓度的萘乙酸对小鼠肝细胞增殖活性的影响，自变量是萘乙酸浓度的不同，因变量是小鼠肝细胞增殖活性，该增殖活性可通过用MTT法测定小鼠肝脏细胞悬液的吸光度来加以体现，而其它对实验结果有影响的因素均为无关变量，应控制相同且适宜。依据实验设计遵循的原则、已经给出的不完整的实验步骤可推知：实验思路③中的A、B、C组为实验组，每天应分别饲喂适量且等量的高、中、低剂量的萘乙酸染毒饲料，D组为对照组，应每天饲喂等量的普通饲料；④中需用MTT法测得小鼠肝脏细胞悬液的吸光度并记录数据。

(2) 已知萘乙酸对人体的毒害作用随其浓度的增加而增强，据此结合实验思路可推知：该实验结果为A、B、C、D组的小鼠肝脏细胞增殖活性依次增强，因此用MTT法测定的小鼠肝脏细胞悬液的吸光度也依次增大。在画出反映实验结果的柱形图时，要注意横坐标标明组别，纵坐标标明细胞悬液吸光度，用以表示各组别吸光度的柱形图的宽度要相等，但长度不等。反映实验结果的柱形图见答案。

(3) ①在研究萘乙酸对小鼠肝细胞增殖活性的影响时，还可以利用血细胞计数板直接进行细胞数目统计。计数过程中压在方格上的细胞只计左线和上线上的细胞数，其目的是避免重复计数，减少误差。

②在研究萘乙酸对小鼠肝细胞具有致畸作用的实验中，肝细胞产生的可遗传变异，只有染色体畸变可以借助显微镜能观察到。因肝细胞是通过有丝分裂进行增殖的，而处于有丝分裂中期的细胞内，染色体的形态比较稳定，数目比较清晰，是观察辨认染色体的最佳时期，所以通常选择有丝分裂中期的细胞进行观察。