人和哺乳动物的尿中含有尿素，环境中大量尿素的存在会造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。某研究小组对土壤中的这类细菌进行分离，用以回收氮源同时净化环境。请回答下列相关问题：

人和哺乳动物的尿中含有尿素，环境中大量尿素的存在会造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。某研究小组对土壤中的这类细菌进行分离，用以回收氮源同时净化环境。请回答下列相关问题：

(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作。配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是____。

(2)采用________________法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在________旁进行操作。

(3)用________________培养基筛选获得能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于________培养基。若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，其菌落周围会出现____________，这是由于尿素被分解产生________，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力________。

【答案】

先调pH，后灭菌稀释涂布平板酒精灯火焰以尿素为唯一碳源选择红色圆环/现象氨越强

【解析】

本题考查微生物的培养与分离，考查对培养基制备、接种方法、微生物分离方法的理解。配制培养基时，应尽可能减少培养基暴露的机会，减少杂菌污染的可能，据此可判断灭菌与调节pH的先后顺序。

(1)配制培养基时，应先调pH，后灭菌，灭菌后再调节pH可能导致培养基的污染。

(2) 将样液进行一系列的梯度稀释，应采用稀释涂布平板法接种，然后培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作，以避免污染杂菌。

(3) 获得能分泌脲酶的细菌，可以用以尿素为唯一碳源的培养基筛选，从功能上划分该培养基属于选择培养基。若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，尿素被分解后产生氨，可以使培养基中加入的酚红指示剂产生红色，使菌落周围出现红色圆环，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株分解的尿素越多，利用尿素的能力越强。

种类

原理

用途

举例

选择培养基

依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计

从众多微生物中分离所需的微生物

加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

鉴别培养基

依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计

鉴别不同种类的微生物

伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌