（一）回答与固定化酵母细胞和去除废水中苯酚有关的问题：<br/>

（一）回答与固定化酵母细胞和去除废水中苯酚有关的问题：

（1）最适于酵母菌生长的是麦芽汁培养基，该培养基在_________压力（121℃）条件下高压蒸汽灭菌15分钟。待灭菌完毕将试管靠在平放的笔上，进行冷却，待试管中的培养基冷却凝固成_________后，即可进行接种。

（2）作为固定化的介质时，海藻酸钠具有良好的韧性，但机械强度较差；而聚乙烯醇具有良好的机械强度，但韧性较差。因此对酵母细胞固定化的介质选择的最佳措施为__________________。固定化酵母的最大优点是__________________，使连续发酵和连续生产成为一种可能。

（3）将不同质量分数组合的固定化小球，放入初始苯酚浓度为1400mg／L的模拟废水中进行降酚处理，设定处理时间为72h，按_________的大小判断其降酚能力的大小。

（4）测定模拟废水中苯酚量的原理是在pH=10左右时，在铁氰化钾的作用下与4-氨基安替吡啉作用生成橙红色的吲哚酚安替吡啉染料，它的水溶液在510nm波长处有最大的_________。若环境条件适宜的情况下测得样品溶液的该值太大影响数据有效性，则应该_____________________。

（二）回答与基因工程、动物克隆和胚胎工程有关的问题。

piggyBac转座系统是一种目前常用的哺乳动物基因工程的研究工具，用于癌基因发现、转基因动物制备、体内基因转移以及体外细胞的基因修饰等。

（1）研究发现已分化的成熟细胞可以在c-Myc、KLF4、Oct4和Sox2等多因子的刺激下诱导成为_________细胞，其中胚胎干细胞具有相对未分化、_________和二倍体核型的特点。而piggyBac转座系统则能够将同时携带这4种调控因子基因的载体插入到染色体上并进行_________，也可以利用piggyBac转座系统的精确删除功能，将诱导形成细胞的_________从基因组中删除，实现细胞治疗前后基因组成的一致性。

（2）通过piggyBac转座系统修饰获得大鼠iPSCs（诱导形成的干细胞），将该细胞的细胞核移植到用紫外线破坏细胞核的卵细胞中获得_________，先通过_________、再经_________、最后胚胎移植从而获得转基因动物。

【答案】

1kg/cm2 斜面 将海藻酸钠和聚乙烯醇混合固定化酵母细胞 易与产物分离、且能反复利用 苯酚去除率 光密度值 用蒸馏水稀释样品溶液 多能 发育全能性 表达 细胞核 重建细胞 胚激活 胚胎体外培养

【解析】

干细胞中c-Myc（原癌基因）、KIF4（抑癌基因）、Sox2和Oct-4等基因处于活跃表达状态，高度分化的细胞Sox2和Oct-4不表达。c-Myc（原癌基因）、KIF4（抑癌基因）突变导致细胞癌变。

（一）（1）最适于酵母菌生长的是麦芽汁培养基，该培养基在1kg/cm2压力（121℃）条件下高压蒸汽灭菌15分钟。待灭菌完毕将试管靠在平放的笔上，进行冷却，待试管中的培养基冷却凝固成斜面后，即可进行接种。

（2）固定化酵母的最大优点是易与产物分离、且能反复利用。由于海藻酸钠具有良好的韧性，但机械强度较差；而聚乙烯醇具有良好的机械强度，但韧性较差，因此对酵母细胞固定化的介质选择的最佳措施为将海藻酸钠和聚乙烯醇混合固定化酵母细胞。

（3）将不同质量分数组合的固定化小球，放入初始苯酚浓度为1400mg／L的模拟废水中进行降酚处理，72h后测定模拟废水中苯酚含量，计算出苯酚去除率，按苯酚去除率的大小判断其降酚能力的大小。

（4）测定模拟废水中苯酚量的原理是在pH=10左右时，在铁氰化钾的作用下与4-氨基安替吡啉作用生成橙红色的吲哚酚安替吡啉染料，它的水溶液在510nm波长处有最大的光密度值。如果在环境条件适宜的情况下测得样品溶液的该值太大，应该用蒸馏水稀释样品溶液，获得数据的真实性和有效性。

（二）（1）在c-Myc、KLF4、Oct4和Sox2等多因子的刺激下高度分化的成熟细胞诱导成为多功能胚胎干细胞。胚胎干细胞的特点是具有相对未分化、发育全能性和二倍体核型。科学家利用piggyBac转座系统通过基因工程将同时携带这4种调控因子基因的载体插入到染色体上，遗传信息进行表达，也可以利用piggyBac转座系统的精确删除功能，将诱导形成细胞的细胞核从基因组中删除，实现细胞治疗前后基因组成的一致性。

（2）用紫外线破坏卵细胞的细胞核，利用细胞核移植技术将诱导形成的干细胞的细胞核移植到卵细胞中，获得重建细胞，先通过胚激活、再经胚胎体外培养、最后胚胎移植从而获得转基因动物。