农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂（含氮有机物）在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不

农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂（含氮有机物）在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。

（1）微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作技术，该技术的核心是________，应该在________旁完成。图中B、C所示操作的目的是将聚集的菌种逐步________。

（2）在选育过程中，应将土壤浸出液接种于以_______________为唯一氮源的固体培养基上。为了筛选出高效的目的菌，可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如下图显示的A～E五种菌株中，________是最理想菌株。

（3）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是______________。对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目________。

（4）操作过程中有三种材料或用具需要消毒或灭菌：

①培养细菌用的培养基与培养皿；

②操作者的双手；

③玻棒、试管、烧瓶和吸管。

其中需要灭菌的是________。（填序号）

【答案】

（1）无菌操作 酒精灯火焰 稀释获得单个菌落

（2）该除草剂 E

（3）稀释涂布平板法 少

（4）①③

【解析】

（1）微生物接种的技术核心是无菌操作，避免杂菌污染，应该在酒精灯火焰旁或无菌操作台上完成。B操作为平板划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离得到由一个细胞形成的单个菌落。

（2）该实验是选育降解该除草剂的细菌，所以培养基上应以该除草剂为唯一氮源。透明圈越大，说明细菌降解的除草剂越多，即E效果最好，为最理想菌株。

（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。由于可能有没有分散的细胞，或培养出的菌落彼此有重叠区域，则导致计数偏低。

（4）操作者的双手应采用消毒的方式减少手上的杂菌。而其他器皿，为保证不被杂菌污染，都需要灭菌。